Do roli Ezio w polskim dubbingu kandydowali: Marcin Dorociński, Paweł Deląg, Artur Żmijewski, Tomasz Kot, Robert Więckiewicz i Bogusław Linda. Najwięcej głosów otrzymał Linda, jednak ostatecznie zdecydowano się nie robić polskiej wersji językowej.
Gdy Ezio dowiaduje się o planowanej egzekucji jego ojca oraz braci, i zbliża się do placu, na którym na zostać wykonany wyrok śmierci, Giovanni, Federico i Petruccio nie mają skrępowanych rąk. Jednak w przerywniku filmowym widać, że ich dłonie związano za plecami.
Plamy krwi na ubraniu Lucy znikają, gdy wysiada ona z samochodu w kryjówce.
Choć akcja gry toczy się na przestrzeni 23 lat, obecni w fabule od samego jej początku Claudia Auditore i Leonardo da Vinci w ogóle się nie starzeją.
Gdy Federico Auditore wraz z bratem i ojcem zostaje stracony przez powieszenie, znajduje się po lewej stronie szubienicy. Jednakże, w filmie o Uberto Albertim, który możemy obejrzeć w bazie danych Animusa, Federico znajduje się pośrodku. W dodatku ma na sobie inne ubranie.
Choć Petruccio Auditore zginął na szubienicy, w bazie danych Animusa napisano, że umarł po wycieńczającej chorobie.
Choć Ezio nie zabił Rodrigo Borgii, po zakończeniu gry "Hiszpan" jest oznaczony w bazie danych Animusa jako martwy.
Dzięki błędowi gry można zabić Rodrigo Borgię w Kaplicy Sykstyńskiej - wystarczy go otruć. Potem możliwym jest odebranie mu Pastorału, ale nie da się użyć mocy tego artefaktu.
Bronią, którą Giovanni przechowywał w ukrytej skrzyni jest zwykły miecz, ale w fimiku, na którym został zamordowany, oręż ta została zastąpiona przez stary miecz syryjski.
Według bazy danych Animusa Francesco de' Pazzi jest starszy od swojego syna Vieriego tylko o 10 lat.
Choć Vieri de' Pazzi zginął w 1478 roku, przy jego portrecie w Villi Auditore napisano, że umarł rok wcześniej.
Choć Emilio Barbarigo zginął w 1485 roku, przy jego portrecie w Villi Auditore napisano, że umarł rok wcześniej.
Po zakończeniu misji, w której Lorendo de' Medici daje Eziowi pelerynę Medyceuszy, władcę Florencji można zobaczyć spacerującego po ulicach miasta. Da się go zabić, nie ponosząc żadnych konsekwencji, choć fabularnie ginie on dopiero 12 lat później, w 1492 roku (pomiędzy 12 i 13 sekwencją).
Można dwukrotnie zabić Dante Moro przed tym, jak faktycznie umiera. Najpierw wystarczy zachowywać się na tyle nieostrożnie po skradnięciu jego złotej maski, by sprowokować go do walki - jest on odporny na normalne ciosy i rozbrojenie, ale podatny na atak specjalny ciężką bronią. Potem da się stoczyć z nim walkę we wspomnieniu, w którym śmierć ponosi Marco Barbarigo - Dante stoi na moście nieopodal.
Według bazy danych Animusa, Paola straciła swoich rodziców w 1446 lub 1447 roku, chociaż jej siostra Annetta (służąca rodziny Auditore) urodziła się w 1457 roku. Któraś z tych dat (albo obie) jest więc fałszywa.
Według bazy danych Animusa Carlo Grimaldi nie był Templariuszem, jednak opis jego portretu w Villi Auditore wskazuje go jako jednego z nich.
Lorenzo de' Medici za pośrednictwem gołębi pocztowych wysyła Eziowi zlecenia zabójstwa. Nowe kontrakty podpisane przez niego pojawiają się także po śmierci władcy Florencji.
Według bazy danych Animusa, Dante Moro był jedynym synem doży Cristoforo Moro. Ojciec wyparł się swojego dziecka po tym, jak straciło ono posadę Kapitana Straży Miejskiej Wenecji w 1468 roku. Dante miał wtedy jednak tylko 8 lat i nie mógł pracować na takim stanowisku.
Strzała, która przebiła kolano Rosy, znika w trakcie gry, by potem pojawić się ponownie.
Choć Leonardo da Vinci naprawdę był leworęczny, w grze jest praworęczny. Ten błąd naprawiono w "Assassin's Creed: Brotherhood".
W Santa Maria Della Visitazione można zobaczyć ogromną ośmiornicę płynącą pod wodą. Pojawia się ona po aktywacji dźwigni znajdującej się nieopodal.
Sekwencja 13: Ezio przez krótki czas może zobaczyć duchy swoich zamordowanych bliskich. Wystarczy, że po spotkaniu z Machiavellim uda się pod swój dom rodzinny.
Niektóre przedmioty takie jak miotły, wędki, motyki, widły czy grabie można podnieść i używać jako broni. Problem w tym, że mają one dokładnie takie same animacje i efekty dźwiękowe jak normalny oręż, przez co można np. poderżnąć komuś gardło... miotłą.